A lombikbébi program során a kezelő nőgyógyász és embriológus együtt dolgozik a program sikeréért.
Ki lehet embriológus? Felsőfokú szakirányú végzettséggel rendelkező személy pl.: biológus, biológia szakos tanár, orvos… stb.), aki megfelelő elméleti képzettséggel rendelkezik és gyakorlatot szerzett az ivarsejtekkel és embriókkal végzett steril munkában és mikroszkópos vizsgálatokban.
Mikor végzi feladatait az embriológus? A tüszőfolyadék leszívásától, az embrió beültetéséig az embriológusok gondozzák a petesejteket, embriókat, spermiumokat. Ez a gondoskodás úgy is elképzelhető, mint egy csecsemőről való törődés: az igényeiknek megfelelő környezetet biztosítanak, táplálják, tisztába teszik és nagy szeretettel vigyáznak Rájuk.
Mi történik az embriológiai, szövettenyésztő laborban?
A tüszőfolyadék vizsgálata
A petesejtek leszívása után a tüszőfolyadék az embriológiai vagy más néven szövettenyésztő laboratóriumba kerül. A laboratórium fel van szerelve azokkal az eszközökkel, amelyek segítségével az embriológusok biztosítani tudják az ivarsejtek és az embriók számára 24-től akár 140 órán keresztül az anyai méhhez hasonló optimális környezetet.
Az ivarsejtek speciális táptalajokba kerülnek, amelyek megfelelő táplálékot és környezetet biztosítanak.
A tüsző folyadékot steril munkavégzést biztosító fülkében úgynevezett lamináris boxban sztereó mikroszkóp alatt vizsgálják át. A megtalált petesejteket egyszerhasználatos edénybe, táptalajba helyezik, feltüntetik rajta a páciens nevét, kórlapszámát, valamint színkóddal látják el. Bár a petesejtek a laikus számára szabad szemmel nem láthatók, de a nagy gyakorlattal rendelkező embriológus képes felismerni.
A petesejtek kiemelése után, a sejteket +37°C-os 6%-os szén-dioxid koncentrációt biztosító termosztátban tárolják a petesejt bontásáig ill. az inszeminációig.
Spermiumok számának meghatározása
Az ondóminta spermiumszámának megállapítását a spermiumok mozgásának hősokkal történő leállítása után, 200-szoros nagyítású mikroszkóp alatt, speciális számláló kamrában végzik. Ennek segítségével pontosan meghatározható az 1 ml ondó folyadékban lévő spermiumok száma.
Spermiumok morfológiai vizsgálata
A spermiumok morfológiai szempontból normálisnak tekinthetők, ha a fej sima, ovális formájú és jól körül határolt akroszómával (ez biztosítja a spermium örökítő anyagának a petesejtbe való jutását) rendelkeznek, valamint az, hogy a nyakon, a közti részen és a farkon nincs sérülés és a citoplazmatikus szemcsék csak a fej nagyságának felénél kisebb mennyiségben vannak jelen.
A morfológiai vizsgálat során minél több hímivarsejtet kell vizsgálni. Ha a fent leírt kritériumok alapján a normális spermiumok aránya kevesebb, mint 4%, akkor a megtermékenyülés esélye minimális, ha 14% fölött van, normális megtermékenyülés várható.
A spermiumok számának, mozgékonyságának és morfológiájának meghatározására már egyéb, például számítógépes alak felismerő vagy elektromos jel változást értékelő rendszereket is használnak.
Here biopsziával nyert minta feldolgozása
Vannak olyan esetek, amikor a rendelkezésre álló ondófolyadékban nem találunk spermiumot, vagy csak nagyon keveset és rossz minőségűeket, ekkor van szükség here biopsziára, melyet kivizsgálás után férfi nemi szervek funkció zavaraival foglalkozó urológus szakorvos (andrológus) végez.
A kivágott, vagy kiszívott szövetminta szintén az embriológushoz kerül, aki a hereszövetet feldolgozza és a here csatornácskák szétnyitásával próbálja kinyerni az esetlegesen ott lévő spermiumokat a megtermékenyítéshez.
A petesejtek inszeminációja
A petesejteket megfelelő mennyiségű táptalajt tartalmazó szövettenyésztő edényekbe osztják, úgy, hogy maximum 6 petesejt kerüljön 1 edénybe, amelybe 100.000, jól mozgó spermiumot adagolnak.
A petesejtek bontása, tisztítása
Megfelelő segédanyagot tartalmazó táptalajban történik a petesejtet körülvevő úgynevezett kumulusz, korona sejtek eltávolítása.
Bontás után a petesejteket friss táptalajba helyezik és megállapítják az érettségüket.
ICSI (introcitoplazmatikus spermium injektálás)
A nem megfelelő számmal, motilitással, morfológiával, immunológiai faktorral rendelkező sperma mintát kezelés után speciális edénybe helyezik, amelyben a petesejtek is külön cseppekben találhatók. A megtermékenyítés, a spermium petesejtbe történő juttatása mikromanipulátorok segítségével történik. Az embriológus által kiválasztott, leginkább megfelelőnek ítélt spermiumot vékony üvegkapillárissal juttatják be a petesejt belsejébe. A megtermékenyített petesejtet friss táptalajba helyezik, a táptalaj felszínére védő olajréteg kerül.
A megtermékenyülés bírálata
A fertilizáció bírálata 15-20 órával a megtermékenyítés után történik (1. nap). A megfelelő megtermékenyülésű zigótákat friss táptalajba rakják és tovább nevelik.
A nem megfelelő megtermékenyülésű zigótákat és meg nem termékenyült petesejteket megsemmisítik.
Az embriók bírálata
A 2., 3., 5. ill. 6. napon történik az embrió transzfer időpontja szerint. Rögzítésre kerül minden embrió blasztomer száma, valamint minden olyan alaktani paraméter, amely az embrió fejlődése és megtapadási képessége szempontjából fontos lehet. Az embriók nevelését a hőmérsékletet, a páratartalmat és a környezeti levegő gáztartalmát pontosan szabályozni képes inkubátorokban történik. Az embriók fejlődésének ellenőrzésére a megtermékenyítést követő 3. és 5. napon kerül sor.
Az embriók tenyésztése EmbryoScope-ban
Ez egy olyan újonnan fejlesztett automata rendszer, amiben folyamatosan, képernyőn keresztül ellenőrizhető a petesejtek megtermékenyülése és az embriók fejlődése.
Transzferálhatóság kritériumai
A megfelelő minőségű fertilizáció jellemzői:
48 órára min. 2-4 sejtes állapot
72 órára min. 6-8 sejtes állapot, vagy min. 2 sejttel való továbbosztódás
96 órára szedercsíra állapot elérése, vagy min. 2 sejttel való továbbosztódás
120 órára korai blasztociszta állapotba jutás.
Tokrepesztés vagy asszisztált hatching
Lézer segítségével az embriót körülvevő tokon, a zona pellucidán nyílást ejtenek, melyen az embrió a transzfert követően könnyebben képes a zona pellucida alkotta burokból kiszabadulni és a méh nyálkahártyájába beágyazódni.
Indikáció:
- három vagy annál több sikertelen IVF – ICSI – ET program
- 35 év feletti női életkor
- 15 mm-nél vastagabb zona pellucida
- emelkedett alap FSH szint, alacsony AMH szint
- fagyasztás-felengedés utáni embriótranszfer
Blasztomer biopszia preimplantációs genetikai diagnózis céljából
Bizonyos apai vagy anyai genetikai probléma esetén lehetőség van az embriók célzott vizsgálatára, hogy hordozzák-e az adott rendellenességet.
A korai embriókban lévő blasztomerek totipotensek (valamennyi sejtjük azonos értékű) a további fejlődésük kedvezőtlen befolyásolása nélkül négysejtes embrió esetén egy, nyolc sejtes embrió esetén 2-3 blasztomer mikromanipulációs módszerrel eltávolítható.
Az így nyert blasztomerek különböző genetikai megbetegedések molekuláris biológiai úton (pl. FISH) történő diagnosztizálására, ill. a preembrió nemének meghatározására (nemhez kötött öröklődő betegségek esetén) használható. Pozitív eredmény esetén az adott preembrió transzferét nem végzik el, ezzel az implantáció előtti genetikai szűrés valósítható meg.
A blasztocisztákból eltávolított sejtek genetikai állományát az örökítő anyag megsokszorozódásán alapuló PCR módszerrel vizsgálják.
Embriótranszfer (ET)
Az ET 99%-a transzcervikálisan történik: a méh belsejébe hüvelyen keresztül vékony katéter segítségével juttatják a zigótát, korai embriót vagy blasztocisztát, vékony katéter segítségével.
A transzferáló katéterhez kis méretű steril fecskendőt csatlakoztatnak. A transzfer médiummal átöblített katéterbe szívják fel kis mennyiségű táptalajjal az embriókat úgy, hogy azokat mindkét oldalról légbuborék határolja. Az embrió transzfert, vagyis az embrió méhüregbe juttatását az orvos végzi.
A transzfer megtörténte után a katéter átmosásával, a táptalaj mikroszkópos ellenőrzésével ellenőrzik, hogy nem maradt-e vissza a transzferálandó embriókból.
Az embrió transzfernél mindig két a szövettenyésztő laboratóriumban dolgozó biológus vagy biológus asszisztens végzi a páciens és az embriók beazonosítását.
Embriók fagyasztása
Azokat az embriókat, amelyek szám felett jönnek létre és megfelelnek a minőségi kritériumoknak, lefagyasztják a későbbi felhasználás érdekében. Ez történhet olyankor, amikor a pár újabb gyermeket szeretne vagy sikertelen beavatkozás esetén. Akkor az egész program ismétlése nélkül újabb lehetőség adódik a terhesség létrejöttéhez.
A fagyasztásnak két fő típusa van az un. lassú fagyasztás (programozható fagyasztó gép) ill. gyors fagyasztás (vitrifikáció), amikor a folyékony nitrogénbe kerülnek rögtön, védőoldatban az embriók.
A fagyasztás során az embrióban lévő vizet cserélik védő oldatra, azért, hogy a jégkristályok kialakulását megakadályozzák, így ezek nem bontják meg a burok egységét.
Sperma fagyasztás
Alkalmazása:
- ejakulációs nehézség esetén
- váltakozó spermakép esetén, feltételezve, hogy a beavatkozás idején nem lesz az ondófolyadékban spermium
- herebiopszia után.
A fagyasztás úgy történik, hogy a megfelelően kezelt spermiumokat megfelelően azonosítva folyékony nitrogénbe helyezik, és speciális tartályokban folyékony nitrogénben – 180 °C-on tárolják.
Budapest, március 30.
Dr. Kanyó Katalin, PhD
ÉKC Új Szent János Kórház és Rendelőintézet
Budai Meddőségi Centrum
Embriológiai labor vezetője
